Neospora caninum in free-range chickens (Gallus gallus domesticus) from southern Brazil / Neospora caninum em galinhas de vida livre (Gallus gallus domesticus) do sul do Brasil

Abstract Neospora caninum is an obligate intracellular parasite that can infect many domestic and wild animals, including birds. These animals are important sources for monitoring of environmental contamination, as they could become infected through sporulated oocysts; however, the real role of birds in the biological cycle of N. caninum remains uncertain. This study aimed to determine the prevalence of anti-N. caninum antibodies, evaluate associated factors, detect the parasite by molecular testing of free-range chickens from Brazil, and evaluate different techniques for its serological diagnosis. Blood samples of 366 chickens from 25 farms were collected for serological assays. The indirect fluorescent antibody test (IFAT) and the indirect enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) were used to detect anti-N. caninum antibodies. Chickens that tested seropositive by IFAT had their brain tissues and a pool of organs (heart, lung, and liver) submitted to PCR for molecular detection of the parasite. Out of 366 chickens, 65 (17.8%) and 163 (44.6%) were seropositive by IFAT and ELISA, respectively. Brain tissues (n=60) and the pools of organs (n=65) were negative in the PCR. Our results showed a high prevalence of antibodies in free-range chickens and that IFAT is the more sensitive technique for the detection of anti-N. caninum antibodies.

Resumo Neospora caninum é um parasita intracelular obrigatório que pode infectar vários animais domésticos e silvestres, incluindo as aves. Esses animais são importantes fontes para o monitoramento da contaminação ambiental, uma vez que eles podem se infectar por meio da ingestão de oocistos. Porém, o real papel das aves no ciclo biológico do N. caninum ainda é incerto. Este estudo teve como objetivos determinar a prevalência de anticorpos anti-N. caninum, avaliar fatores associados, detectar o parasita por meio de teste molecular em galinhas de vida livre do Brasil e avaliar diferentes técnicas para o diagnóstico sorológico. Amostras de sangue de 366 galinhas de 25 fazendas foram coletadas para testes sorológicos. A reação de imunofluorescência indireta (RIFI) e o ensaio de imunoabsorção enzimática (ELISA) foram utilizados para detectar anticorpos anti-N. caninum. As amostras de tecidos (cérebro, coração, pulmão e fígado) de galinhas soropositivas na RIFI foram coletadas e submetidas à PCR para detecção molecular do parasita. Das 366 galinhas, 65 (17,8%) e 163 (44,6%) foram soropositivas pela RIFI e ELISA, respectivamente. Nenhuma amostra foi positiva na PCR. Esses resultados demonstram uma elevada prevalência de anticorpos em galinhas de vida livre e que a RIFI é uma técnica mais sensível para a detecção de anticorpos anti-N. caninum.

First molecular detection of Haemoproteus spp. and Plasmodium spp. in eared doves (Zenaida auriculata) in Brazil / Primeira detecção molecular de Haemoproteus spp. e Plasmodium spp. em pombos (Zenaida auriculata) no Brasil

Abstract The aim of this study was to verify the presence and identify the species of haemosporidian parasites in eared doves (Zenaida auriculata) in Brazil. Two hundred and eleven male and female eared doves were trap-captured in four different regions of Londrina city, in southern Brazil. Whole blood was collected in EDTA tubes through heart puncture after euthanasia in a CO2 chamber. A nested PCR targeting the mitochondrial cytochrome b gene (cyt b) of Haemoproteus spp./Plasmodium spp. was performed, followed by an enzymatic digestion to identify the genus. Phylogenetic trees were constructed to determine the closely related species. Out of 211 eared doves, 209 (99.05%) were positive for Haemoproteus spp. and/or Plasmodium spp. RFLP analysis showed that 72.72% (152/209) of eared doves were positive only for Haemoproteus spp., 6.22% (13/209) were positive only for Plasmodium spp., and 21.05% (44/209) of eared doves had mixed infections. Genetic analysis found four samples that were homologous with Haemoproteus multipigmentatus and one that was homologous with Plasmodium sp. This is the first molecular study of hemoparasites from eared doves in Brazil, and it is also the first description of H. multipigmentatus and Plasmodium spp. infection in eared doves in Brazil.

Resumo O objetivo deste estudo foi verificar a presença e a identificação espécies de parasitas hemosporídeos em pombos (Zenaida auriculata) no Brasil. Duzentos e onze pombos machos e fêmeas foram capturados em quatro regiões diferentes de Londrina, sul do Brasil. Amostra de sangue foi coletada em tubos contendo EDTA por meio de punção cardíaca, após eutanásia em câmara de CO2. Uma nested PCR com alvo no gene mitocondrial citocromo b (cyt b) de Haemoproteus spp./Plasmodium spp. foi realizada, seguida de digestão enzimática para identificar o gênero. A árvore filogenética foi construída para determinar a relação com outras espécies. Das 211 pombas, 209 (99,05%) foram positivas para Haemoproteus spp./Plasmodium spp. A análise RFLP demonstrou que 72,72% (152/209) das pombas foram positivas somente para Haemoproteus spp.; 6,22% (13/209) foram positivas somente para Plasmodium e 21,05% (44/209) das pombas tiveram infecções mistas. A análise genética mostrou quatro amostras homólogas com H. multipigmentatus e uma com Plasmodium spp. Este é o primeiro estudo molecular de hemoparasitas em pombos no Brasil. E é também a primeira descrição da infecção por H. multipigmentatus e Plasmodium spp. em pombos Z. auriculata no Brasil.